focha 14 radom gabinety lekarskie

Absolutne poziomy IFN-y wykrywane ex vivo w tkankach maziowych są jednak zwykle małe (30), chociaż wewnątrzkomórkowe analizy FACS i ELISPOT wskazują, że większość maziowych komórek T wykazuje potencjał dla IFN-y. wyrażenie (7, 8). W związku z tym zbadaliśmy wpływ zbieżnych IL-10 i TGF-a. dodatek na IFN-y produkcja in vitro. IFN-. poziomy indukowane przez IL-18 w połączeniu z IL-12 lub IL-15 były konsekwentnie tłumione w obecności IL-10 i TGF-a. (Figura 4, P = 0,002 dla komórek jednojądrzastych SF, P = 0,038 dla zawiesin pojedynczych komórek pochodzących z błony maziowej). Dane te wskazują, że kombinacje cytokin aktywujących komórki T, które mogą być wyrażane pojedynczo w niskich stężeniach, mogą podtrzymywać odpowiedzi błony maziowej Th1. Co więcej, ich działanie funkcjonalne jest prawdopodobnie modyfikowane przez obecność aktywności przeciwzapalnej cytokiny. Figura 4 Zrekombinowaną IL-18 (100 ng / ml), IL-12 (5 ng / ml) i / lub IL-15 (100 ng / ml) dodano do SF (a) i hodowli błony maziowej (b) przez 48 godziny w obecności (puste pola) lub nieobecność IL-10 (20 ng / ml) / TGF-a (5 ng / ml) (wypełnione pola) i IFN-y wytwarzanie określano za pomocą testu ELISA. Dane (średnia . SEM) są łączone z 10 indywidualnych próbek pacjentów z RA. Zwiększona maziowa monokina i ekspresja NO przez IL-18. Badania interwencji klinicznej wyraźnie wykazały znaczenie TNF-a w patogenezie RA (31). W związku z tym ustaliliśmy wpływ IL-18 na TNF-a. produkcja. IL-18 i IL-12 indywidualnie indukowały TNF-a wytwarzanie zarówno przez jednojądrzaste komórki SF, jak i hodowle błony maziowej (Figura 5). Kombinacja IL-12 z IL-18 indukowała synergistyczne wzmocnienie TNF-a produkcja w obu systemach hodowli (P = 0,002 dla kultur zarówno w porównaniu do średnich). Dodatek samej IL-15 indukował niewielkie poziomy TNF-a wytwarzanie, które było znacząco wzmocnione przez połączenie z IL-18 (P = 0,03 dla komórek jednojądrzastych SF, P = 0,013 dla hodowli błony maziówkowej) lub IL-12 / IL-18 (P = 0,01 i P = 0,002, odpowiednio) (rysunek 5). Obecność IL-10 i TGF-. w połączeniu skutecznie zniosło syntezę TNF-a w tych kulturach. Aby określić pierwotne komórkowe źródło TNF-a produkcji, przeprowadziliśmy wewnątrzkomórkową analizę FACS w podgrupie kultur SF, która konsekwentnie ujawniała TNF-a ekspresja w makrofagach CD14 +, ale nie w limfocytach T CD3 +, w ciągu 4 godzin od dodania IL-18 i Brefeldiny A (Figura 5c). Podobne dane uzyskano, gdy IL-12, IL-15 i IL-18 dodano w połączeniu (dane nie pokazane). Aby określić potencjalny wpływ na inne monokiny, badaliśmy zdolność IL-18 do regulacji ekspresji GM-CSF w hodowlach maziówkowych, ponieważ GM-CSF może być niezależnie indukowany przez IL-18 w PBMC (27). Znaczącą regulację w górę wytwarzania GM-CSF obserwowano w 9 z 9 hodowli błony maziówkowej po dodaniu 100 ng / ml IL-18 (średnia 270. 58 pg / ml w porównaniu z IL-18 889. 242 pg / ml; P <0,004). . Żadne dodatkowe wzmocnienie nie zostało wywołane przez jednoczesne dodanie IL-12 lub IL-15. Dane te wyraźnie wskazują, że potencjał funkcjonalny IL-18 w błonie maziowej rozciąga się poza regulację Th1 tak, aby obejmował bezpośredni wpływ na makrofagi w celu promowania ekspresji cytokin. Figura 5 (a) TNF-a wytwarzanie w hodowlach, identycznych z tymi opisanymi na fig. 4, oznaczano za pomocą testu ELISA. Dane (średnia . SEM) są łączone z 10 indywidualnych pacjentów z RA, z których każdy jest hodowany w trzech powtórzeniach. (b) Zwiększony wewnątrzkomórkowy TNF-a ekspresja w monocytach CD14 + w jednojądrzastych komórkach maziówki mierzona za pomocą FACS po dodaniu 100 ng / ml IL-18. Dane są reprezentatywne dla 10 podobnych eksperymentów. Dopasowane izotypowo barwienie przeciwciała kontrolnego było mniejsze niż 1%. Produkcja NO jest cechą zapalnej błony maziowej, gdzie jest wytwarzana przez SFB i przez makrofagi (24) [patrz też: borg warner jasionka, zoz nidzica, śniadecja ]