Izolacja i charakterystyka cDNA specyficznego dla wirusa Norwalk.

Wirus Norwalk, ważna przyczyna epidemii, ostre, nie powodujące bakterii zapalenie żołądka i jelit u dorosłych i dzieci, wymyka się adaptacji do hodowli tkankowej, rozwojowi modelu zwierzęcego i klonowaniu molekularnemu. W tym badaniu część genomu wirusa Norwalk kodującego immunoreaktywny region sklonowano z bardzo małych ilości zakażonego stolca przy użyciu niezależnej od sekwencji amplifikacji pojedynczego startera. Sześć zachodzących na siebie komplementarnych klonów DNA (cDNA) izolowano przez przesiewanie immunologiczne. Eksprymowane zrekombinowane białko z reprezentatywnego klonu reagowało z sześcioma siedmioma wysokimi mianami. Specyficzne dla Norwalk, surowice po infekcji, ale nie z odpowiednimi surowicami do wstępnej infekcji. Sekwencja kwasu nukleinowego dla wszystkich klonów określała pojedynczą otwartą ramkę odczytu sąsiadującą z białkiem beta-galaktozydazy wyrażanym lambda gt11. Tylko sondy oligonukleotydowe swoiste dla nici pozytywnej (zdefiniowanej przez otwartą ramkę odczytu) hybrydyzowały z wrażliwą na RNaseA sekwencją kwasu nukleinowego oporną na DNaseI wyekstrahowaną z taboru zakażonego Norwalk. Ponadto, RNA wyekstrahowano z serii po infekcji, ale bez preinfekcji, stolce od trzech z pięciu ochotników hybrydyzowały z sondą cDNA wirusa Norwalk. Sondę oligonukleotydową swoistą dla klonów hybrydyzowano z frakcjami gradientowymi chlorku cezu, zawierającymi oczyszczony wirion Norwalk. Podsumowując, zidentyfikowano antygenowy, kodujący białko region genomu wirusa Norwalk. Ten epitop ma potencjalną przydatność w przyszłych badaniach epidemiologicznych sero- i molekularnych wirusowego zapalenia żołądka i jelit Norwalk.Images
[więcej w: mbp pabianice, elear gorzów, klinika arciszewscy ]