leki z natury olsztyn

W przypadku podwójnego barwienia skrawki najpierw wybarwiono anty-IL-18 i opracowano z substratem peroksydazy SG (niebieski, Vector Laboratories Ltd., Peterborough, Wielka Brytania). Po obróbce nadtlenkiem wodoru (Sigma) w celu zatrzymania resztkowej aktywności HRP, skrawki dodatkowo wybarwiono przeciwciałem anty-CD68 lub anty-CD3 (DAKO, Ely, Wielka Brytania) i opracowano z DAB (brązowy), bez kontrastu jądrowego. Kontrole negatywne, w tym pominięcie lub obu przeciwciał pierwotnych lub dodanie dopasowanych izotypowo przeciwciał kontrolnych o nieistotnej swoistości, potwierdziły brak reaktywności krzyżowej między przeciwciałami anty-IL-18, anty-CD3 lub anty-CD68. SFB były formaldehydem utrwalonym in situ w szkiełkach laboratoryjnych Lab-Tek (Nunclon) i barwione, jak już tu opisano. Indukcja i ocena CIA. CIA indukowano, jak opisano wcześniej (25). W skrócie, myszy myszy DBA / (Harlan Olac, Bicester, Wielka Brytania) immunizowano (śródskórnie) 200 ug bydlęcego kolagenu typu II (CII, Sigma) w CFA lub niekompletnym adiuwancie (IFA, Difco Laboratories, Detroit, Michigan, USA). USA). Po śródotrzewnowym CII (200 .g w PBS) prowokacji w dniu 21, rozwój zapalenia stawów oceniano przez rumień, obrzęk lub utratę funkcji na łapę (skala 0-3, maksimum, 12 na mysz) przez niewidomego obserwatora. Myszy uśmiercono, tylne kończyny utrwalono w 10% obojętnej buforowanej formalinie, a skrawki po 5. M wybarwiono hematoksyliną i eozyną (Sigma). Myszy immunizowane CII / IFA otrzymywały również dootrzewnowe iniekcje mysiej IL-18 (100 ng) w PBS / 0,1% BSA lub PBS / 0,1% BSA od dnia do dnia 4 i od dnia 20 do dnia 24. Analiza statystyczna. Wykonano to w oprogramowaniu Minitab (State College, Pennsylvania, USA), stosując odpowiednio sparowany t test i analizy Manna-Whitneya. Wyniki Ekspresja receptora IL-18 i IL-18 w błonie maziowej RA. Próbowaliśmy zidentyfikować mRNA IL-18 i ekspresję białka w tkankach maziówkowych RA. Stosując RT-PCR, wykazaliśmy konstytutywną ekspresję mRNA IL-18 w 20 z 20 próbek maziówkowych RA (Figura 1a) i w 8 z 10 zbadanych próbek OA. IL-18 wykryto za pomocą ELISA w 12 z 18 SF otrzymanych od pacjentów z RA (Figura 1b), podczas gdy dopasowane surowice zazwyczaj zawierały niskie poziomy samej IL-18 (SF vs. surowica: P <0,005). Wcześniejsze usunięcie czynnika reumatoidalnego nie zmieniało wykrytych poziomów IL-18. Co więcej, nie uzyskano znaczącego sygnału, gdy 8 SF badano stosując anty-IL-1 (3. przeciwciało jako przeciwciało wychwytujące w identycznym w inny sposób protokole ELISA. Zatem ani nasza reakcja krzyżowa z zanieczyszczeniem IL-1, ani RF nie wyjaśnia naszych obserwacji. Mediana stężenia wykryta w próbkach dodatnich wynosiła 342 pg / ml (zakres wewnątrz kwartyla, 210-1606), porównywalna z TNF-a. stężenia normalnie wykrywane w SF (11). Stężenia IL-12 (p40) w SF (mediana, 82 pg / ml, zakres IQ, 0 <313) nie korelowały z wartościami IL-18. Dane te wyraźnie wskazują, że IL-18 ulega ekspresji w błonie maziowej w RA i, ponieważ sekrecja IL-18 wymaga rozszczepienia prekursora (13), silnie sugerują, że dojrzała IL-18 jest obecna w przedziale maziówkowym. Figura (a) mRNA IL-18 wykryto w błonie maziowej RA i OA za pomocą RT-PCR (reprezentatywny dla 20 tkanek RA i 10 OA). (b) Znacznie wyższe poziomy IL-18 wykryto w RA SF niż w surowicach (18 dopasowanych próbek testowanych po usunięciu czynnika reumatoidalnego). Aby określić rozkład ekspresji IL-18, wygenerowaliśmy mAb dla ludzkiej IL-18 (klon D3B6), który wykazywał wzór barwienia cytoplazmatycznego w tkankach maziówkowych RA (Figura 2a). Barwienie neutralizowano przez uprzednią inkubację z rekombinowaną IL-18, ale nie z strukturalnie pokrewnymi cytokiną IL-1P. (dane nie pokazane). Barwienie IL-18 wykryto w 16 z 18 zbadanych synovia RA [hasła pokrewne: badania prenatalne żory, przychodnia gdynia karwiny, krioglobulinemia ]