prywatne gabinety ginekologiczne sosnowiec

Reaktywne formy tlenu są uwalniane przez aktywowane makrofagi pęcherzykowe i mogą przyczyniać się do zabijania wirusów (28). In vitro SP-A bezpośrednio stymuluje zależną od lucygeniny chemiluminescencję (12) i powoduje zależne od dawki wzmocnienie uwalniania rodników tlenowych ze szczurzych makrofagów pęcherzyków płucnych (29). Przeciwnie, pobudzone makrofagi pęcherzykowe płuc wytwarzają mniej anionów ponadtlenkowych w obecności SP-A (30). Pomimo znacznych dowodów in vitro, że SP-A bierze udział w obronie gospodarza, jego rola in vivo została niedawno wykazana. Myszy z niedoborem SP-A (SP-A (3 / produkowane przez ukierunkowaną inaktywację genów są wrażliwe na paciorkowce grupy B i zapalenie płuc Pseudomonas aeruginosa po dotchawicznym podaniu organizmu (31, 32). Chociaż istnieją przekonujące dowody na to, że SP-A wzmacnia obronę gospodarza przed wirusami in vitro, jego rola w usuwaniu wirusowych patogenów in vivo nie została wykazana. W niniejszym badaniu sprawdzono, czy SP-A. /. myszy miały zwiększoną podatność na zakażenie RSV in vivo. Metody Produkcja zwierzęca. Mysi gen SP-A był inaktywowany przez celowanie genowe, jak opisano wcześniej (33). Płuca SP-A. /. myszy nie zawierają wykrywalnego mRNA lub białka SP-A (33). Aby ograniczyć zmienność związaną z różnicami szczepów, 129J typu dzikiego (+ / +) i SP-A. /. badano myszy tego samego szczepu. Zwierzęta przechowywano i badano zgodnie z zatwierdzonymi protokołami dla Instytucji Opieki nad Zwierzętymi i Komitetem ds. Żywności w ośrodku dla zwierząt w Fundacji Badawczej Szpitala Dziecięcego. Zastosowano samce i samice myszy ważące około 20-30 g (8. 10 tygodni). Oczyszczanie ludzkiego SP-A. Ludzki SP-A uzyskany od pacjentów z białaczką pęcherzykową oczyszczono metodą ekstrakcji 1-butanolem Haagsman et al. (34). Oczyszczony SP-A rozpuszczono (2 mg / ml) w NaHEPES (pH 7,2) i testowano za pomocą testu Limodus Amoebocyte Lysate (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, USA) na endotoksynę. SP-A stosowany w niniejszym badaniu nie miał wykrywalnej endotoksyny (<0,06 EU / ml). Przygotowanie wirusa. Komórki HEp-2 utrzymywano w minimalnych niezbędnych pożywkach Eagle (EMEM) uzupełnionych glutaminą, amfoterycyną, streptomycyną, penicyliną G i 10% FBS o niskiej immunoglobulinie (10% EMEM). Szczep A2 wirusa RSV został dostarczony przez BS Graham (Vanderbilt University, Nashville, Tennessee, USA). RSV oczyszczono z łysinek trzy razy pod agarozą. Trzecią łysinkę zaszczepiono w monolityczną warstwę komórek HEp-2. Po adsorpcji przez godzinę w temperaturze pokojowej dodano 10% EMEM i infekcję prowadzono przez 3 dni w 37 ° C, aż cała monowarstwowa substancja wykazała działanie cytopatyczne. Zawartość kolby ponownie zawieszono i rozdzielono w porcjach po ml, szybko zamrożono alkoholem / suchym lodem i przechowywano w temperaturze <80 ° C. Zasoby robocze pochodziły z tego podstawowego szczepu, infekując subkonfluentne monowarstwy HEp-2 przy wielości infekcji wynoszącej 0,1 i zbierając pojedynczą warstwę, gdy wydawało się, że jest ona całkowicie zakażona. Komórki i pożywki (50 ml) poddano działaniu ultradźwięków (homogenizator ultradźwiękowy, Cole-Parmer Instrument Co., Chicago, Illinois, USA) na lodzie z ośmioma rozbłyskami s przy użyciu wydajności 50. Zawiesinę sklarowano przez odwirowanie przy 1800 g przez 10 min. Supernatant szybko zamrożono i przechowywano w temperaturze około 80 ° C. Szczepionka do nosa. Podawanie RSV do dróg oddechowych myszy przeprowadzono przez dotchawiczą inokulację 106 lub 107 jednostek tworzących łysinki (pfu) rozcieńczonych w 10% EMEM. W celu dostarczenia wirusa RSV zastosowano inokulację do krtani jak opisano wcześniej (31). Kontrole otrzymały sterylną 10% EMEM. Wyczyść wirusa. Ilościowe hodowle RSV homogenatów płuc przeprowadzono 3, 5 i 7 dni po zaszczepieniu zwierząt RSV lub RSV plus SP-A [podobne: klinika arciszewscy, koszałka tczew, grzybica ogólnoustrojowa objawy ]