Unikalna pirofosfohydrolaza ektonukleotydowa związana z pęcherzykami pochodzącymi od chondrocytów świni.

Wcześniejsze badania wykazały zwiększoną aktywność pirofosfohydrolazy nukleotydowej (EC 3.6.1.8) (NTPPHazy) w ekstraktach detergentowych zdegenerowanej chrząstki ludzkiej zawierającej kryształy dihydratu pirofosforanu wapnia (CPPD) w porównaniu z tymi pochodzącymi z choroby zwyrodnieniowej stawów lub prawidłowej chrząstki. Następnie wykazano, że NTPPHaza jest ekto-enzymem, a jego aktywność zwiększała się w płynie maziowym od pacjentów z kryształami CPPD w stosunku do płynów z innych typów zapalenia stawów. Oczyściliśmy rozpuszczalną 61-kD NTPPHazę z kondycjonowanych pożywek hodowanej narządowo chrząstki stawowej świni do jednorodności elektroforetycznej. Jego sekwencja końca NH2 przez 26 cykli wykazała <30% homologii do dowolnej wcześniej zgłoszonej sekwencji białka. Przeciwciało wzbudzone do syntetycznego peptydu odpowiadającego tej sekwencji reagowało z denaturowanym, ale nie natywnym enzymem. To przeciwciało reagowało przeciwko sedymentacyjnemu białku 127-kD związanemu z pęcherzykiem w kondycjonowanej pożywce z hodowli chrząstki stawowej lub z chondrocytów w pierwotnej hodowli monowarstwowej i przeciwko szeregowi rozpuszczalnych białek w kondycjonowanym supernatancie pożywki, w tym białku o masie cząsteczkowej 61 kD, stanowiącemu nasz pierwotny izolat. Nie wykryto reaktywności w 1% ekstraktach SDS z przemytych hodowanych chondrocytów, chociaż zawierały one większą aktywność NTPPHazy niż pożywki kondycjonowane. Przeciwciało przeciwko PC-1, innej ektoNTPPHazie, reagowało z 1% ekstraktami SDS z całych chondrocytów, ale nie przeciw tym frakcjom chromatograficznym zawierającym główną część aktywności NTPPHazy. Uwalnianie związanego z pęcherzykiem enzymu 127 kD do kondycjonowanej pożywki stymulowano trzy do siedmiokrotnie przez TGF beta 1. Przeciwciało reagowało również z szeregiem rozpuszczalnych białek i z 127-kD ulegającym sedymentacji białkiem w ludzkim płynie maziowym. Badania kinetyczne potwierdziły istnienie unikalnej związanej z pęcherzyką NTPPHazy; pozorny Km (mM) NTPPHazy z błoną chondrocytarną wynosił 1,5 i 3,0 przy pH 7,3 i 9,88, odpowiednio; pozorny Km (mM) NTPPHazy związanej z pęcherzykiem wynosił 0,83 i 1,28 przy pH 7,3 i 9,88. Dane sugerują istnienie wyjątkowej ecto-NTPPHazy związanej z pęcherzykami pochodzącymi z prawidłowej chrząstki stawowej.
[podobne: falck sapieżyńska, sowiarnia wadowice, legionelloza ]